期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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首页>中华医学杂志
- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
携带抑癌基因的重组腺相关病毒载体的构建及病毒包装滴定方法探讨
张佑彬；冷希圣；彭吉润；何湘君；吕建峰；翁山耕；王申五；杜如昱
关键词：腺相关病毒, 癌, 肝细胞, 基因治疗
摘要：目的构建携带多肿瘤抑制基因p16(mts-1)及抑癌基因p21WAF1的腺相关病毒(AAV)载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,为进行肝癌基因治疗的实验研究奠定基础.方法以p16 cDNA及p21 cDNA 全长为目的基因,构建AAV载体prAAV-AFP-p16,prAAV-AFP-p21,prAAV-CMV-p16及prAAV-CMV-p21.其中前两种载体能在人肝癌细胞中特异表达目的基因.应用脂质体将重组载体与辅助质粒PspRC72、腺病毒粘粒共转染包装细胞,2 d后感染野生型腺病毒,至细胞裂解病变明显时收获.纯化后用聚合酶链反应法扩增倍比稀释后病毒液内的甲胎球蛋白或巨细胞病毒启动子 DNA,进行病毒DNA颗粒滴度测定.然后用重组腺相关病毒与腺病毒(MOI均为10)共感染C12细胞,至细胞裂解病变明显时再收获.结果重组载体经酶切鉴定测序证实.293细胞、C12细胞包装病毒效果良好,病毒颗粒滴度介于1013～1014个/ml之间.携带GFP的感染性AAV滴度为5×1010个/ml.电镜下病毒呈小圆形空斑状,直径25～30 nm.MOI值100时,rAAV-AFP-GFP病毒感染肝癌细胞的阳性率达70%,为携带目的基因的AAV病毒用于肝癌细胞的促凋亡研究提供了定量指标.结论成功构建了AAV载体,探讨了病毒包装方法,即第一次转染成功后,再经过反复感染收获,重组病毒得到稳定扩增,方法简便,获得了大量高纯度的重组AAV病毒.
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