期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
嗜麦芽窄食单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因的克隆及表达
卓超；钱元恕
关键词：β内酰胺酶类, 基因表达, 细菌学
摘要：目的探讨嗜麦芽窄食单胞菌所产金属β-内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征. 方法以MBL-E试验筛查到的一株产金属β-内酰胺酶(MBL)嗜麦芽窄食单胞菌750为研究对象;MBL的等电点、对酶抑制剂的酶稳定性及抗生素的水解率按常规测定;抽提细菌染色体、PCR扩增blaMBL全基因并进行测序;构建blaMBL-pET32a(+)重组体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.结果菌株750仅产一种β-内酰胺酶,其pI为6.6;以对亚胺培南的水解率为100%计,对青霉素、拉氧头孢、头孢他啶、氨曲南的相对水解率分别依次为1420%、27%、9%和1%,酶活性可被EDTA抑制,但不受克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂影响.染色体DNA模板的PCR结果显示,酶全基因全长为867 bp,经序列分析和同源性比较,与已报道的金属酶L1的编码基因blaS(注册号AJ291672)和blaL1(AF010282)的核苷酸同源性均为99.31%,推定的氨基酸序列同源性分别为99.31%和98.96%.大肠杆菌BL21(DE3)转化含酶基因的blaMBL-pET32a(+)重组质粒后,MBL- E试验为产MBL阳性,对亚胺培南和头孢他啶的MIC分别为12 mg/L和2 mg/L,对亚胺培南的MIC较母株低10倍左右;SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白为48kDa,其中酶蛋白约为26kDa.结论嗜麦芽窄食单胞菌750所产MBL为染色体介导的L1型金属酶;构建的含酶基因的重组体blaMBL-pET32a(+)在大肠杆菌BL21(DE3)成功表达并重现其耐药特征;表达株对亚胺培南的耐药水平低于母株提示MBL仅是菌株750耐药性决定因素之一.
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