期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
骨形成蛋白-7基因转染对人肾小管上皮细胞外基质分泌的影响
李娅；陈楠；俞海瑾；董晓蓓；黄秋花
关键词：肾小管, 上皮细胞, 骨形态发生蛋白质类, 转染
摘要：目的构建骨形成蛋白-7(BMP-7)全长基因表达质粒,观察BMP-7过表达对转化生长因子(TGF)-β诱导的人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌(ECM)的作用.方法将BMP-7全长cDNA连接进入真核细胞表达质粒pcDNA3.1中,以脂质体Superfect介导的方法将重组表达质粒pcDNA3.1-BMP-7转染入人肾小管上皮细胞,挑选阳性克隆,以获得稳定转染的人肾小管上皮细胞株.采用Western 印迹方法检测BMP-7在肾小管上皮细胞培养上清液中的表达.给予TGF-β(5 ng/ml)进行处理,应用RT-PCR和ELISA的方法,观察BMP-7过表达对纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅰ、Ⅲ(Col Ⅰ、Ⅲ)等细胞外基质mRNA和蛋白质表达的作用.结果 EcoR I限制性酶切鉴定以及DNA双向测序结果均说明所构建的重组质粒为BMP-7全长基因表达质粒.Western 印迹方法检测稳定转染人肾小管上皮细胞蛋白表达量明显高于空载体转染组(P<0.05).TGF-β处理24、48、72 h后, 5 ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3.1)+5 ng/ml TGF-β组Col Ⅰ、Ⅲ、FN mRNA的表达量明显高于正常对照组,空白质粒转染组(pcDNA3.1)[ColⅠ (A值): 0.897±0.100、1.054±0.090 vs 0.286±0.010、0.319±0.080;Col Ⅲ (A值): 1.114±0.040、0.961±0.090 vs 0.354±0.020、0.403±0.040; FN (A值): 1.257±0.090、1.188±0.060 vs 0.413±0.020、0.454±0.060,均P<0.05];Col I、FN mRNA表达量pcDNA3.1-BMP-7转染组+5 ng/ml TGF-β组明显低于TGF-β处理组(0.591±0.007、0.687±0.020,P<0.05),ColⅢmRNA表达有降低趋势(0.809±0.090),但差异无统计学意义.细胞培养上清液FN含量5 ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3.1)+5 ng/ml TGF-β组明显高于正常对照组(P<0.05),而 pcDNA3.1-BMP-7转染组+5 ng/ml TGF-β组表达明显低于TGF-β处理组(P<0.05).结论 BMP-7过表达可以显著减少TGF-β所致的人肾小管上皮细胞FN、 Col Ⅰ、Ⅲ mRNA和细胞培养上清液中的FN的表达.表明BMP-7减少小管间质炎症反应和纤维化的发生,改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的.
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