期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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首页>中华医学杂志
- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
利用腺病毒提高腺相关病毒对肿瘤细胞的转导效率
李惠明；王丰；韦芳；董小岩；王慧萍；裘玮；张巨峰；陈霞芳；吴小兵；黄倩
关键词：肿瘤, 基因疗法, 腺病毒, 人, 腺相关病毒, 转导
摘要：目的 探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨.方法 采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null组),并以相同剂量的AAV2单独感染(AAV2组)作为对照.用荧光显微镜观察EGFP阳性细胞,流式细胞仪检测EGFP阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western印迹检测EGFP蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率.换用萤光素酶(Luc)标记的AAV2,通过Luc检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率.荧光定量PCR检测感染后肿瘤细胞DNA及mRNA的EGFP相对拷贝数,观察Ad-null对AAV2复制及转录的影响.结果 随着Ad-null滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞EGFP阳性细胞数明显增加.流式细胞仪计数的EGFP阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于AAV2组(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null组单个细胞的荧光强度约为AAV2组的1.32倍.各AAV2+Ad-null组EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于AAV2组.体外、体内Luc检测均显示Ad-null显著增强AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为AAV2单独感染的28和4.5倍.Ad-null可提高肿瘤细胞内AAV2的mRNA水平,当Ad-null滴度为1、10 MOI时AAV2+Ad-null组的EGFP拷贝数明显高于AAV2组,而Ad-null对细胞内AAV2的DNA影响不大,AAV2+Ad-null组与AAV2组的EGFP拷贝数差别不大.结论 联合使用少量腺病毒可明显提高AAV对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV转录水平有关,为今后应用AAV作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据.
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