雷帕霉素对肝移植术后胆管细胞再生的影响

摘要：目的 探讨白介素6(IL-6)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)通路是否参与肝移植术后胆管上皮细胞(BEC)再生过程,以及免疫抑制剂雷帕霉素是否通过影响STAT3活化从而抑制BEC增殖.方法 将大鼠随机分为5组:正常肝移植组(OLT)-1 h、OLT-12 h组(供肝分别冷保存1、12 h后行原位肝移植术)、抗sIL-6R组(OLT-12 h组术前1 h静脉注射可溶性抗IL-6受体抗体16.7 μg/kg,术后每日给予相同剂量直至观察结束)、RPM组(OLT-12 h组术前3 d腹腔注射雷帕霉素 0.05 mg/kg,术后每日给予相同剂量直至观察结束)、sham组(假手术组),样本检测时间点为术后1、3、7、14 d.测定血清碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)含量以评价胆道功能,并进行肝脏组织学检查;采用酶联免疫吸附法检测肝组织IL-6含量;实时定量RT-PCR法检测BEC内IL-6 mRNA表达;Western 印迹法检测BEC内磷酸化STAT3(p-STAT3)、细胞周期蛋白(cyclin) D1的蛋白表达水平;电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测BEC内STAT3的DNA结合活性;免疫组化法测定BEC增殖情况.结果与sham组相比,OLT-1 h组术后1、3 d,血清GGT、ALP轻度、短暂升高:其中GGF分别为(69±6)U/L、(34±4)U/L,ALP分别为(86±9)U/L、(45±3)U/L,BEC损伤轻微.肝组织及BEC内IL-6含量、P-STAT3及cyclin D1表达略增加:其中肝组织IL-6含量分别为(273±20) ng/g、(159±18)ng/g,在BEC内IL-6 mRNA表达分别为0.40±0.04、0.23±0.04,BEC内P-STAT3表达分别为0.420±0.023、0.230±0.040,而cyclin D1表达分别为0.580±0.023、0.420±0.015;STAT3的DNA结合活性也相应短暂增加,与sham组之间的积分吸光度(A)比值为38±10、22±7;BEC再生不明显.相反,OLT-12 h组术后1 d,血清GGT、ALP即明显升高,分别为(108±9)U/L、(189±14)U/L,BEC损伤严重,至术后14 d才恢复正常.肝组织及BEC内IL-6含量增加:其中肝组织IL-6含量分别为(659±28) ng/g、(446±23) ng/g,在BEC内IL-6 mRNA表达分别为0.73±0.06、0.54±0.04.BEC内P-STAT3 和cyclinD1蛋白表达上调,其中BEC内P-STAT3分别为0.72±0.04、0.58±0.06,cyclinD1蛋白表达分别为0.88±0.04、0.74±0.07,STAT3的DNA结合活性明显增加,sham组的A值分别为45±16、31±12;BEC再生活跃.OLT-12 h组经抗sIL-6R和RPM处理后,p-STAT3 和cyclinD1表达明显降低,STAT3的DNA结合活性及BEC再生受到明显抑制,术后14 d仍可见细胞损伤的形态学表现,ALP、GGT明显高于sham组水平.不同的是sIL-6R还能显著降低OLT-12 h组肝内IL-6的表达,而RPM对IL-6的表达并无明显影响.结论 IL-6/STAT3信号通路介导肝移植术后BEC的再生/修复过程,雷帕霉素通过抑制STAT3活化从而影响BEC的再生,可能对肝移植术后胆道功能的恢复产生不利影响.