期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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首页>中华医学杂志
- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
人脐带间充质干细胞不同分离方法的效果比较
刘玲英；柴家科；段红杰；侯玉森；尹会男；郁永辉；胡泉；郝岱峰；冯光
关键词：间质干细胞, 脐带, 胶原酶类, 胰蛋白酶, 细胞分离
摘要：目的 对比分析分离人脐带间充质干细胞(MSCs)常用方法的效果,筛选比较高效的分离方法.方法 采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织(n=15),充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜,将其剪碎至1 mm3的组织块,洗涤离心确定组织块的总体积,平均分为4组,分别采用组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法,分离获得人脐带MSCs,行锥虫蓝染色计数细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态;使用免疫荧光染色检测细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD31、CD44、CD45、人类白细胞抗原I(HLA-I)和人类白细胞抗原Ⅱ类分子(HLA-DR)的表达情况,进行细胞鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖曲线.结果 组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法4种方法均可分离获得干细胞,但获得细胞的数量和增殖能力不同.4种方法获得的细胞数量分别为(5.44±0.21)×105、(4.03 ±0.24)×105、(4.91 ±0.33) ×l05和(5.94 ±0.40)×105,胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著多于其他3种方法,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).组织块法种植后第9～11天观察到细胞在组织块周围生长,而其他3种方法种植后第2天即可见贴壁生长的细胞.4种方法细胞达到90％ ～95％融合的时间分别为(18.5±3.5)、(8.0±1.0)、(7.5±1.5)、(3.5 ±±0.5)d,胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著短于其他3组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).组织块法原代细胞的形态多为多角形,不规则,细胞的体积较大,单纯胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法原代细胞的形态均较短小,而胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞形态呈细长的梭形.4种方法得到的细胞均阳性表达CD105、CD90和CD73,弱表达HLA-I,不表达CD31、CD45和HLA-DR.胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞的增殖速率显著快于其他3种方法.结论 胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法是一种高效的提取人脐带MSCs的方法.
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