期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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首页>中华医学杂志
- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
血管内皮生长因子转染后脂肪组织来源干细胞蛋白分泌表达及成骨活性的检测
刘兆杰；胡永成；张银光；贾健
关键词：血管, 内皮生长因子, 脂肪组织, 干细胞, 转染
摘要：目的 观察人血管内皮生长因子(VEGF)转染后的人脂肪组织来源干细胞(ADSCs)对VEGF蛋白的分泌和表达情况及转染后细胞的成骨活性变化.方法 胶原酶消化脂肪获取人ADSCs,经鉴定后进行培养传代.采用Trizol法获取编码人VEGF成熟肽的基因序列,将获得的目的基因VEGF与含绿色荧光蛋白的双顺反子表达载体连接成重组质粒pSELECT-GFP zeo-VEGF,分别转染第2、3、4、5代ADSCs.荧光显微镜下验证转染结果,酶联免疫(ELISA)检测转染后细胞的VEGF分泌.对第2代转染后的ADSCs于成骨条件下培养,检测上清液中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙蛋白(OC)的分泌.结果 脂质体介导的VEGF目的基因片段能够成功转染至体外培养的ADSCs;经ELISA定量检测,上清液中VEGF mRNA表达水平在转染组显著增高,对照组无明显变化.成骨条件培养下于转染后第3、5、7天ELISA检测人VEGF转染组对ALP (29.2±2.4)、(38.0±2.3)、(46.7±2.4) U/L(金氏单位)和OC的分泌量(13.2±1.6)、(18.3±1.6)、(25.3±1.5) μg/L以及实时聚合酶链反应(PCR)检测对ALP(0.1±0.0)、(0.2±0.0)、(0.3±0.0)和OC的分泌量(0.042 ±0.004)、(0.071±0.008)、(0.127±0.011)均明显高于空载体转染组及空白细胞组(P＜0.01).免疫印迹法检测人VEGF转染组中ALP/GAPDH和OC/GAPDH灰度比值明显高于空载体转染组和空白细胞组(P＜0.01).结论 经脂质体介导可成功将人VEGF目的基因片段转染至人ADSCs,并能够在体外持续有效地表达具有生物学活性的VEGF mRNA;转染后的ADSCs成骨定向分化能力明显增强.
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