锌指 Krüppel 样转录因子2对慢性阻塞性肺疾病支气管上皮细胞中γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的作用

摘要：目的：探讨锌指Krüppel样转录因子2（ KLF2）对慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）支气管上皮细胞中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS ）的调控作用。方法（1）临床试验：收集湖南省肿瘤医院胸外科2008年12月—2009年12月肺癌伴或不伴慢阻肺肺叶切除患者临床肺组织标本，分为慢阻肺组和对照组，应用原位杂交及免疫组化检测两组患者肺组织中KLF2、γ-GCS mRNA及蛋白的表达情况；并对KLF2 mRNA及蛋白与γ-GCS mRNA及蛋白， KLF2及γ-GCS 蛋白与吸烟指数、第1秒用力呼气容积（ FEV1）占预计值百分比（ FEV1％）、FEV1与用力肺活量（ FVC）的比值（ FEV1／FVC）进行相关分析。（2）动物实验：提取大鼠原代支气管上皮细胞，加入10％烟草烟雾提取物（TSE）培养6 h后，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞谷胱甘肽（GSH）含量；将KLF2的特异性抑制剂用脂质体转染至细胞中抑制KLF2蛋白表达；再分为KB组（不予任何处理的空白对照组）、KB＋TSE组（加入TSE处理）、NC组（转染miRNA的对照组）、NC＋TSE组（miRNA转染和TSE处理）、92a组（转染KLF2抑制剂）、92a＋TSE组（KLF2抑制剂转染和TSE处理），用逆转录-PCR、Western印迹法观察各组细胞中KLF2、γ-GCS的mRNA及蛋白质表达变化。结果（1）临床试验：慢阻肺组肺组织中KLF2mRNA、蛋白和γ-GCS mRNA、蛋白呈强阳性表达，均显著高于对照组（0.32±0.04比0.19±0.03、0.35±0.05比0.22±0.03和0.28±0.03比0.16±0.03、0.31±0.05比0.21±0.03，均P＜0.01），且两者表达部位一致；KLF2蛋白与γ-GCS mRNA及蛋白表达均呈正相关（r＝0.705、0.722，均P＜0.01），KLF2及γ-GCS蛋白与吸烟指数、FEV1％、FEV1／FVC 均呈正相关（ r＝0.552、0.728、0.670及r＝0.631、0.727、0.657，均P＜0.01）。（2）动物实验：大鼠支气管上皮细胞中GSH含量KB＋TSE组显著高于KB组[（28.05±2.04）比（7.27±0.33） nmol／mg，P＜0.01]；KLF2 mRNA、蛋白和γ-GCS mRNA、蛋白表达KB＋TSE组（1.715±0.026、1.842±0.028和2.117±0.067、1.879±0.065）均显著高于KB组（1.130±0.017、1.177±0.033和1.378±0.053、1.177±0.042），92a组（0.472±0.028、0.634±0.025和0.582±0.025、0.554±0.021）均显著低于KB 组、NC 组（1.047±0.056、1.092±0.045和1.303±0.037、1.252±0.037），92a＋TSE组（0.262±0.017、0.288±0.017和0.337±0.022、0.321±0.022）均显著低于 KB ＋TSE 组、92a 组、NC ＋TSE 组（1.576±0.036、1.646±0.066和1.948±0.093、1.843±0.078）（均P＜0.05）。结论 KLF2通过调控慢阻肺支气管上皮细胞中γ-GCS的表达而发挥抗氧化作用。