期刊简介
中华医学会主办。本刊是中华医学会会刊,是综合性医学学术周刊，是中国国家图书馆、中国科技信息研究所、医学科学院科技信息研究所、中国科学文献计量评价研究中心等国家科技信息情报部门所列的核心期刊。辟有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、医学动态 、疑难病例析评、循征病例报告、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态、新技术新方法、新药与临床、临床医学影像、读者来信等栏目。刊物面向国内外全体临床医师，各级医院的医护及医疗技术与管理人员，是广大医务人员了解国内外最新医学研究动态和信息的重要途径。
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- 杂志名称：中华医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0376-2491
- 国内刊号：11-2137/R
- 出版周期：周刊
期刊荣誉：1992年与1996年连续两次在中宣部、国家科委、新闻出版署组织的优秀科技期刊评比中荣获全国优秀期刊一等奖期刊收录：上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 文摘与引文数据库, 国家图书馆馆藏, 医学文摘, 万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 剑桥科学文摘, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
微RNA-221诱导PC-9肺癌细胞对吉非替尼的耐药机制
高园园；康小红；王颖；赵可雷；王亚楠；寇卫政；苗战会；路平
关键词：肺肿瘤, 微RNAs, 吉非替尼, 抗药性, 肿瘤
摘要：目的 探讨微RNA(miR)-221诱导PC-9肺癌细胞对吉非替尼的耐药机制.方法 应用慢病毒空载对照(LV-NC)和LV-miR-221转染PC-9细胞并建立细胞稳转株PC-9/NC和PC-9/miR-221.荧光定量PCR法检测稳转细胞株中miR-221的相对表达量;细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测吉非替尼(0～4 μmol/L)对细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测吉非替尼对细胞凋亡的影响;荧光定量PCR法和免疫荧光法检测凋亡酶激活因子-1(APAF-1) mRNA和APAF-1蛋白相对表达量;双荧光素酶报告基因实验检测APAF-1与miR-221的关系;Western印迹检测表皮生长因子受体(EGFR)及其磷酸化(p-EGFR)和APAF-1、剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase-3)蛋白相对表达量.结果 PC-9/NC细胞中miR-221的相对表达量显著低于PC-9/miR-221细胞[(1.00±0.082)比(40.24±0.017)] (P＜0.01);PC-9/NC细胞半数抑制浓度(IC50)显著低于PC-9/miR-221细胞[(IC50 =0.1 μmol/L)比(IC5o ＞4 μmol/L)](P＜0.05);PC-9/NC细胞凋亡率显著高于PC-9/miR-221细胞[(33.42±4.28)％比(10.27±1.12)％](P＜0.05);PC-9/NC细胞中APAF-1 mRNA的表达量显著高于PC-9/miR-221细胞中[(1.000+0.069)比(0.701±0.072)] (P ＜0.05),PC-9/NC细胞中APAF-1蛋白的相对表达量明显高于PC-9/miR-221细胞.共转染荧光素酶质粒pmir-REPORT-APAF-1-wt和miR-221a模拟物后,miR-221a抑制荧光素酶活性显著高于转染miRNA阴性对照组(P＜0.01);吉非替尼均可下调PC-9/NC和PC-9/miR-221细胞中的p-EGFR,PC-9/miR-221细胞中APAF-1、Cleaved-caspase-3蛋白明显低于PC-9/NC细胞,吉非替尼上调PC-9/NC细胞中的APAF-1、Cleaved-caspase-3等促凋亡蛋白表达水平显著高于PC-9/miR-221细胞(P＜0.05).结论 miR-221可能通过下调APAF-1的表达诱导PC-9细胞对吉非替尼耐药.
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